Como funciona a imunofluorescência?

Perguntado por: Enzo Gustavo Vicente Araújo  |  Última atualização: 30. April 2022
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É um exame realizado em material não fixado de biópsias (em geral pele e rim) para demonstrar a presença de imunoglobulinas. Este exame auxilia no diagnóstico e classificação de lesões como glomerulopatias e algumas doenças da pele. A técnica de Imunofluorescência Direta se baseia numa reação antígeno-anticorpo.

Como funciona a imunofluorescência indireta?

Imunofluorescência Indireta - Princípios do Teste

Antígenos expressos em células ou tecidos são fixados em uma superfície/lâmina (fase sólida). O soro do paciente é então adicionado na superfície para que anticorpos contra o antígeno pesquisado se liguem, formando um sítio de ligação antígeno-anticorpo.

É possível utilizar mais de um Fluoróforo em um mesmo teste?

Usando diversos fluoróforos ligados a diferentes anticorpos é possível determinar em um mesmo tecido a colocalização de dois ou mais antígenos, fato muito importante para a pesquisa em biologia celular.

O que é imunofluorescência direta e indireta?

Imunofluorescência é uma técnica especial de microscopia que se baseia na marcação de estruturas celulares por anticorpos específicos que estão ligados quimicamente a corantes fluorescentes. Estes anticorpos ligam-se diretamente ou indiretamente aos antígenos de interesse.

Quais os principais marcadores da imunofluorescência?

Entre os marcadores mais comumente empregados, podem-se citar os fluorocromos, as enzimas e os compostos radioativos e eletro-opacos. Na leitura das reações de imunofluorescência (IF), devem-se enumerar três formas distintas de fluorescência: específica, não específica e auto- fluorescência.

Fundamentos de Metodologias Biomédicas #3: Imunofluorescência

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Qual princípio da imunofluorescência?

A imunofluorescência indireta baseia-se no princípio de uma dupla camada, é utilizada na detecção de anticorpos por antígenos impregnados em uma lâmina, onde se aplica primeiramente um anticorpo específico não fluorescente.

Quais os tipos de imunofluorescência?

Existem dois tipos distintos de imunofluorescência.
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Imunofluorescência Direta
  • Fixação do esfregaço da lâmina;
  • Tratamento com anticorpo marcado;
  • Incubação;
  • Lavagem para remover excesso de anticorpos marcados não ligados;
  • Visualização no microscópio fluorescente.

O que é teste de imunofluorescência direta?

É um exame realizado em material não fixado de biópsias (em geral pele e rim) para demonstrar a presença de imunoglobulinas. Este exame auxilia no diagnóstico e classificação de lesões como glomerulopatias e algumas doenças da pele. A técnica de Imunofluorescência Direta se baseia numa reação antígeno-anticorpo.

Qual a diferença entre o ELISA direto e indireto?

– ELISA indireto:

Esse método é bem semelhante ao direto, porém entre a segunda lavagem e a adição do cromógeno com o substrato, é adicionado o segundo anticorpo (o anti-anticorpo) e feita uma nova lavagem para retirar o que não se ligou.

O que é aglutinação direta?

A aglutinação direta consiste em antígenos que são naturais da célula que se aglutinam a anticorpos específicos oferecidos ao meio.

O que significa Imunoblot?

É um imunoensaio em suporte sólido que utiliza antígenos imobilizados para detectar anticorpos contra proteínas específicas. Os antígenos utilizados são altamente puros e geralmente isolados por afinidade cromatográfica.

Como funciona o teste de imunocromatografia?

O teste imunocromatográfico é um tipo de teste rápido que identifica doenças infecciosas, hormônios e outros analitos, por associação específica a anticorpos com partículas coloridas conjugadas. O resultado de um teste de imunocromatografia geralmente considera a presença de antígenos na amostra.

O que significa ausência de aglutinação?

Neste caso, o sistema imune reconhecerá esse corpo estranho e reagirá, aglutinando as hemácias, podendo levar a morte. Porém, no caso em que o sangue doado - mesmo sendo diferente do receptor,– não possua antígenos (como o tipo sanguíneo O) não haverá aglutinação, pois não há o que ser reconhecido pelo sistema imune.

Como é a técnica de hemaglutinação indireta?

HEMAGLUTINAÇÃO INDIRETA

As hemácias estão entre os melhores suportes de antígenos para os testes de aglutinação. Na hemaglutinação indireta (HAI) elas são suportes para antígenos que são adsorvidos à sua superfície, que para doença de Chagas são antígenos de Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença.

Como funciona a microscopia de fluorescência?

Em um microscópio de fluorescência, a luz de um comprimento de onda específico é passada através de um condensador de microscópio especializado que focaliza a luz em um feixe muito estreito. Quando a luz atinge a amostra, os compostos luminescentes ficam excitados e começam a emitir luz.

O que é imunofluorescência indireta em células HEp 2?

A pesquisa de anticorpos contra antígenos celulares em células HEp-2, também conhecida como fator antinúcleo (FAN HEp-2), é um exame de rastreamento de autoanticorpos utilizado como suporte para o diagnóstico de doenças autoimunes sistêmicas e órgão-específicas.

O que é ELISA indireto?

O modelo mais simples é conhecido como ELISA indireto, onde um antígeno que encontra-se aderido a um suporte sólido (placa de ELISA) é preparado e, em seguida, colocado sobre os soros que estão sendo testados, em busca de anticorpos contra o antígeno.

O que é teste de ELISA direto?

- ELISA Direto

Quando o antígeno/alvo está ligado na placa, e um anticorpo (AC) primário já conjugado com um emissor de cor ou fluorescência é colocado diretamente sobre o alvo. A sensibilidade deste tipo de ELISA é a mais baixa e quase não é usado.

Qual o sinal de um ELISA indireto?

ELISA Indireto

Caso o antígeno a ser procurado esteja presente na amostra, o anticorpo primário irá se ligar ao seu alvo. Em seguida, haverá uma lavagem para retirar os anticorpos que não se ligaram ao antígeno teste.

O que é imunofluorescência para toxoplasmose?

Classicamente, o diagnóstico da toxoplasmose é baseado na pesquisa de anticorpos contra o parasita. Muitas pesquisas têm utilizado a imunofluorescência indireta (IFI) para o diagnóstico da toxoplasmose.

O que é anticorpo marcado?

Radioimunoensaio de competição com anticorpo marcado: Uma quantidade fica do antígeno é imobilizada em um suporte sólido. Adiciona-se uma quantidade fixa de anticorpo marcado específico, misturada com a amostra em teste ou uma série de soluções padrão com concentrações variadas do antígeno solúvel.

O que imunoenzimático?

A reação imunoenzimática é a base para muitos testes utilizados para identificar antígenos ou anticorpos. O sistema envolve anticorpos conjugados com enzimas.

Onde se encontram os anticorpos?

Elas podem ser encontradas no plasma, em compartimentos citoplasmáticos, na superfície de algumas células, no líquido intersticial e até mesmo no leite materno. Os anticorpos são produzidos por plasmócitos, que se formam após a diferenciação de um leucócito chamado de linfócito B.

O que é esquistossomose imunofluorescência?

Propõe-se uma técnica de imunofluorescência para diagnóstico da esquistossomose mansônica, adotando-se tecidos de Biomphalaria glabrata contendo esporocistos secundários de Schistosoma mansoni. A reação de imunofluorescência indireta é executada sobre cortes histológicos preparados por inclusão em parafina.

Quais são os tipos de imunoglobulinas?

As imunoglobulinas (anticorpos) são proteínas de importância vital que circulam no sangue e realizam uma grande variedade de tarefas. Eles influenciam significativamente o equilíbrio do nosso sistema imunológico. O tipo de anticorpo predominante no sangue humano é a imunoglobulina G (IgG).

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